Este conteúdo adicional vê a tripulação original reunida a bordo da Nostromo. Brett e Kane estão mortos; ao lado de Ash e Lambert, agora cabe a você como Dallas, Parker ou Ellen Ripley, encontrar uma maneira de isolar o Alien e superar o terror que os confronta. Alien: Isolation é um jogo de terror de sobrevivência em primeira pessoa que captura o medo e a tensão evocados pelo filme clássico de 1979 de Ridley Scott. Os jogadores se encontram em uma atmosfera de medo constante e perigo mortal, enquanto um Xenomorfo imprevisível e implacável está perseguindo e matando nas sombras. Com pouco poder e despreparado, você deve vasculhar recursos, improvisar soluções e usar sua inteligência, não apenas para ter sucesso em sua missão, mas para simplesmente permanecer vivo.

Começa com uma cena do cofre hipersono a bordo da Nostromo, mas depois corta para uma cena de Ripley, Lambert, Parker, Ash e Dallas discutindo o Alien no refeitório da nave após a morte de Brett. Eles acham que o Alien está usando os dutos dentro da nave para se movimentar, e Dallas sugere levar o Alien até a câmara de vácuo principal. O jogador então decide se Ripley, Parker ou Dallas vão para os dutos. O jogador pega um lança-chamas, rastreador de movimento, Macaco de Manutenção e possivelmente um sinalizador e Medikit. Eles então se encontram com Ash, que lhes diz que os sistemas de segurança fecharam várias portas, então eles terão que reunir equipamentos no caminho. O jogador desce uma escada para o Convés B e Ash fecha a escotilha atrás deles. Enquanto evita ser morto pelo Alien, o jogador fecha as escotilhas de manutenção 00B1 e 00B2. Eles então passam pelo compartimento de garras de pouso, onde o cadáver de Brett está localizado, e selam a escotilha 00B3 ou 00B4. Depois de selar a escotilha, Ash diz a eles para encontrar o sistema de eixo de ar primário e levar o Alien ao Convés C. Lá, Ash pode se conectar aos sistemas de câmara de vácuo a partir de seu terminal. Depois de entrar nos dutos de ar primários, o rastreador de movimento do jogador começa a funcionar mal. Lambert encontra o jogador em seu rastreador de movimento e diz a eles que o Alien também está dentro dos eixos. Lambert tenta guiar o jogador através dos eixos enquanto eles evitam o Alien. Eventualmente, o jogador chega ao final dos eixos e desce para o Convés C. O jogador então tem que conectar Ash aos sistemas de câmara de vácuo. Ash diz a eles que está abrindo a câmara de vácuo externa, mas levará algum tempo, então eles devem encontrar um lugar para se esconder. Eventualmente, Ash informa que está preparado e instrui o jogador a esperar que o Alien entre na câmara externa da câmara de vácuo e esteja pronto para fechá-la. Assim que o Alien entra na câmara de vácuo, o jogador se aproxima da câmara de vácuo e pressiona o botão para selar a câmara de vácuo. No entanto, Ash diz a eles que algo estranho está acontecendo, e o interruptor não funciona. Um alarme dentro da câmara de vácuo é ativado e o Alien foge, nocauteando o jogador. Assim que acordam, Ash está esperando por eles. Termina com uma cena do laboratório médico, quando a voz de Ash é ouvida entregando seu monólogo icônico do filme: "Traga de volta a forma de vida. Prioridade um. Todas as outras prioridades rescindidas. Você ainda não entende com o que está lidando, não é? Organismo perfeito. Sua perfeição estrutural é igualada apenas por sua hostilidade. Admiro sua pureza. Um sobrevivente. Desnublado pela consciência, remorso ou delírios de moralidade. Última palavra. Não posso mentir sobre suas chances. Mas... você tem minhas condolências. "